?支原體檢測試劑盒（PCR方法）

貨號：ZK-PL4008

規(guī)格：50次

描述：

支原體污染已經(jīng)成為細(xì)胞培養(yǎng)中高度重視的問題，因此定期進(jìn)行支原體污染檢測十分必要。本試劑盒采用PCR方法，能特異性檢測各種培養(yǎng)細(xì)胞生物材料（如細(xì)胞培養(yǎng)物、實驗動物分泌物、動物血清等）中支原體的污染。試劑盒使用的混合引物針對支原體 16s rRNA 序列保守區(qū)域設(shè)計，可直接使用細(xì)胞培養(yǎng)液作為 PCR 模板，特異性擴(kuò)增支原體DNA，搭配配套的 Mix（2×）組分，一小時內(nèi)即可完成，靈敏度高，可檢測低至20個拷貝的支原體。

效期：
有效期12個月

儲存與運輸：

冰袋（wet ice）運輸；-20℃保存

組成：

PCR Mix（2×）	1 mL
Primer Mix	100 μL
Positive Control	50 μL
Free Water	1 mL

操作步驟
1. 樣品準(zhǔn)備：取適量待檢細(xì)胞培養(yǎng)上清于潔凈的PCR 管中，利用 PCR 儀 95℃熱處理5 min后作為模板。血清樣本可用Free  Water 稀釋后，取適量樣本于潔凈的PCR管中，利用PCR儀95℃熱處理 5min 后作為模板；
2. PCR 體系配制：每次實驗需設(shè)置陰性對照（將 1μL待檢樣品換成等量的Free  Water）與陽性對照（在1μL待檢樣品中加入0.5μL Positive Control 后一起作為Template），實驗時戴一次性口罩與手套，謹(jǐn)慎操作，防止操作不當(dāng)引入外源支原體污染；

Component	Volume
Template	1 μL
Primer  Mix	2 μL
PCR Mix（2×）	10 μL
Free   Water	To 20 μL

3. PCR 程序設(shè)置：

Step	Temperature	Time	Cycles
Initial Denaturation	98℃	2 min	1
Denaturation	98℃	20 s	30
Annealing	56℃	25 s
Extension	72℃	10 s
Final extension	72℃	5 min	1
Hold	4-16℃	Forever

4. 凝膠電泳：取10μL PCR 產(chǎn)物，使用 1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測；
5. 結(jié)果分析：每次實驗通過與陰性對照、陽性對照檢測結(jié)果比較確認(rèn)樣品支原體污染情況，陽性條帶大小500 bp左右。如陰性對照檢測結(jié)果中有條帶很有可能是PCR體系中出現(xiàn)污染，建議重新實驗確認(rèn)結(jié)果。如有必要，也可對PCR產(chǎn)物進(jìn)行常規(guī)測序，以確定具體的支原體種屬。

注意事項：
1. 本試劑盒可以檢測M.orale，M.arginini，M.bovis，M.fermentans，M.gallisepticum，M.hominis， M.pirum，Ureaplasmaspp，M.hyorhinis，M.pneumoniae，A.laidlawii等至少 11 種以上支原體污染。
2. 所有試劑在使用前于冰上徹底解凍、混勻，使用完畢后于-20℃保存。
3. 每次實驗必須設(shè)置陰性對照、陽性對照，實驗組建議設(shè)置樣品模板梯度。
4. 操作時必須佩戴口罩，嚴(yán)格按照 PCR 操作標(biāo)準(zhǔn)，防止引入外源污染影響實驗結(jié)果。
5. 為了確保細(xì)胞實驗的可靠性及穩(wěn)定性，建議定期進(jìn)行支原體污染檢測。
6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。??