?超氧化物檢測試劑盒 Superoxide Assay Kit

貨號：ZK-PL3983

超氧化物檢測試劑盒（Superoxide Assay Kit）是一種用于超氧化物快速高靈敏檢測的試劑盒。超氧化物通常指超氧陰離子(superoxide anion)，是一種氧分子的自由基，在細胞內(nèi)主要有NADPH氧化酶把電子傳遞給氧分子產(chǎn)生。超氧陰離子是一種強氧化劑，主要由中性粒細胞、巨噬細胞為代表的免疫細胞，在各種應激條件下產(chǎn)生，從而抵御微生物的感染。在病理條件下，過度產(chǎn)生的超氧陰離子，也會導致機體損傷和引發(fā)各種疾病。

原理：

本試劑盒利用超氧化物可以還原WST-1產(chǎn)生可溶性有色物質(zhì)為基礎來檢測超氧化物。試劑盒的檢測試劑中添加了過氧化氫酶（Catalase）等，可以清除過氧化氫等過氧化物對WST-1顯色的干擾，使測定結(jié)果更加準確。另外本試劑盒還提供了超氧化物歧化酶（SOD），可以驗證本試劑盒檢測的是否為超氧化物，以排除檢測體系中其它可能存在的干擾。對于本試劑盒，加入SOD通?？梢砸种?0%以上的超氧化物。

適用范圍：

試劑盒組成：

（1）超氧化物檢測緩沖液 50 ml/瓶        （2）WST-1溶液 1 ml/管

（3）Catalase溶液 200μl/管           （4）SOD溶液 50μl/管

儲存條件：

-20℃儲存，一年有效

所需設備:

酶標儀，最佳波長450nm

操作步驟：

1. 超氧化物檢測工作液的配制：

根據(jù)測定樣本數(shù)量按下表所示比例配制超氧化物檢測工作液。

2. 細胞接種和孵育：取需要測定的細胞，如果是懸浮細胞，利用PBS洗滌一次，再利用超氧化物檢測緩沖液重懸細胞，調(diào)整到合適濃度后，接種100

μl到96孔板中（細胞數(shù)量請通過預實驗優(yōu)化）；如果是貼壁細胞，提前一天接種到96孔板中，24小時后吸去培養(yǎng)基，利用PBS洗滌一次，再加入100

μl超氧化物檢測緩沖液。然后加入相應的超氧化物檢

測工作液配制的藥物及超氧化物刺激劑（如PMA等），在37℃培養(yǎng)箱孵育1小時或經(jīng)過優(yōu)化的時間。

具體檢測對照設置如下表所示：

3. 孵育結(jié)束后，利用酶標儀測定A450nm。如果樣品吸光度過高，可適當降低接種細胞數(shù)量或縮短孵育時間后測定，如果樣品吸光度過低，可適當增加

接種細胞數(shù)量或延長孵育時間后測定。

4、數(shù)據(jù)處理：

利用未加干預因素處理的樣品和加了干預因素處理的樣品吸光度減去空白對照吸光度后，計算干預因素對超氧化物產(chǎn)生的上調(diào)或下調(diào)比例。

注意事項

1. WST-1溶液、Catalase溶液和SOD溶液請盡量避免反復凍融，可以適當分裝。

2. 初次使用試劑盒時，小體積液體試劑請適當離心后使用。

3. 初次測定超氧化物，可取小鼠骨髓細胞，500000細胞/孔接種到96孔板中，利用50ng/mlPMA刺激1小時，檢測超氧化物作為陽性對照。

4. 本產(chǎn)品僅限專業(yè)人員用于科學研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。