?液體樣本葡萄糖GLU含量測定試劑盒（氧化酶法）

貨號：ZK-PL3924

規(guī)格：200次
500次
25000次

描述：葡萄糖能夠為組織細胞提供能量。生理性饑餓、劇烈運動、營養(yǎng)不良都會導(dǎo)致血糖降低，糖尿病、肥胖等疾病會使血糖升高。采用氧化酶法進行葡萄糖含量測定，是世界衛(wèi)生組織和中國《全國臨床檢驗操作規(guī)程》推薦的臨床血糖檢測方法。本試劑盒對此法經(jīng)過改良，使檢測靈敏度比普通方法提高約10倍，其檢測下限為5~10μmol/L，線性范圍在10~20000 μmol/L。適用于測定血液、細胞培養(yǎng)基內(nèi)的低濃度葡萄糖含量，也勝任各種臨床和基礎(chǔ)實驗中對于葡萄糖含量的測量。

原理：根據(jù)Trinder反應(yīng)原理1,2，葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD)作用下生成葡萄糖酸和過氧化氫(H2O2)；然后過氧化物酶(POD)催化過氧化氫，使色原物質(zhì)(4-氨基安替比林)生成醌亞胺，顏色的深淺與葡萄糖濃度成正比。

適用范圍：測定人及動物血清、血漿、腦脊液、等樣品中的葡萄糖含量

組成(200次)：(1)1ml 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品10 mmol/L (相當(dāng)于180 mg/100 ml)    (2) 32 ml 試劑R1   (3) 8 ml 試劑R2

儲存條件：4 oC 保存 6個月有效

所需設(shè)備：721、722型可見光分光光度計、酶標(biāo)儀、生化分析儀。最佳工作波長550-555nm，如儀器無此波長建議優(yōu)先選用570、530、490nm。

操作步驟：

一．工作溶液配制：按4:1比例，取8 ml試劑R1與2 ml試劑R2混合得到10 ml 工作溶液。當(dāng)天使用或4oC保存1周。

二．標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：10 mM葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水或與樣本緩沖液一致的液體稀釋為2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625μM。注意設(shè)置0濃度對照反應(yīng)管。由于葡萄糖測定反應(yīng)的線性關(guān)系甚好且范圍很寬，通常設(shè)置黑體標(biāo)記的4管即可，一般不需要設(shè)置大于2~10mM的標(biāo)準(zhǔn)管，以此得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線用來測定大于2 mM葡萄糖濃度通常不會失真。世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦也可僅設(shè)置單一濃度的標(biāo)準(zhǔn)管。注意：不能使用用戶自己簡單配制的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。

三、葡萄糖含量測定：

1. 參見下表加樣。先加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品，后加工作溶液。可依據(jù)葡萄糖濃度高低微量調(diào)整樣品與工作液體積比例。超出線性范圍可適當(dāng)稀釋。

2. 37oC 反應(yīng)20min (15~30min)或25oC室溫反應(yīng)30 min但靈敏度略降。反應(yīng)平衡后顏色在60 min內(nèi)穩(wěn)定。

3. 先用蒸餾水+工作液空白管調(diào)零，然后測定各管OD值。

4. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算葡萄糖濃度。

附Excel作圖步驟：各標(biāo)準(zhǔn)管OD值為y軸，濃度為x軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù)，點擊做圖向?qū)?，選擇-散點圖-，點擊-完成-。(2)鼠標(biāo)右鍵點圖上的某一點，點擊-添加趨勢線-，點擊-選項-，點擊-顯示公式-和-R2值-。

5. 如果僅用單一標(biāo)準(zhǔn)管：葡萄糖濃度(mmol/L) = 標(biāo)準(zhǔn)品濃度 × (樣品管OD－空白管OD) / (標(biāo)準(zhǔn)管OD－空白管OD)。

加樣表

（可微量調(diào)整樣品與工作液體積比例）

說明：

1. 人空腹血糖參考值3.89-6.11 mmol/L (70-110 mg/dl)，低血糖癥臨界水平2.7-3.89 mmol/L，高血糖癥臨界水平6.11-7.22 mmol/L。不同單位之間的換算公式：1 mmol/L = 0.0555 mg/100 ml (dl)；1 mmol/L × 18 = 1 mg/100 ml (dl)。

2. 檢測線性范圍0.02~20 mmol/L。濃度超過20 mmol/L用蒸餾水或生理鹽水稀釋1-2倍后測量。批內(nèi)變異系數(shù)為0.7~2.0%，批間變異系數(shù)為~2%。準(zhǔn)確度與精密度可達到臨床檢測要求。

3. 不能用于直接測定尿液葡萄糖含量。尿液中尿酸濃度比較高，會消耗葡萄糖氧化酶反應(yīng)中產(chǎn)生的過氧化氫，降低呈色反應(yīng)，從而引起負誤差使結(jié)果偏低。還原性物質(zhì)如尿酸、抗壞血酸、膽紅質(zhì)、谷胱甘肽可競爭消耗反應(yīng)產(chǎn)生的過氧化氫，使測定結(jié)果偏低。含強還原劑如二硫蘇糖醇、巰基乙醇樣品不建議使用本法。本法反應(yīng)終體系可容忍的干擾物質(zhì)最高濃度：血紅蛋白10 g/L，黃疽標(biāo)本膽紅素340 μmol/L，氟化鈉3 g/L，尿素46.7 mmol/L (280 mg/dl)，尿酸2.95 mmol/L (50 mg/dl)，肌酐4.42 mmol/L (50 mg/dl)，半胱氨酸50 mg/dl，甘油三酯500 mg/dl。

4. 《全國臨床檢驗操作規(guī)程》指明測定血糖用草酸鉀-氟化鈉抗凝：每5ml血液加0.2 ml 6%草酸鉀-4%氟化鈉；其優(yōu)點是抑制糖酵解和分解，測得的葡萄糖濃度更接近真實；缺點是干擾其它生化檢查項目。枸椽酸鈉抗凝劑易引起溶血，也干擾許多生化檢查項目。如必須用同一份標(biāo)本做全套生化檢測，可采用肝素鈉抗凝劑。

5. 血樣應(yīng)在30分鐘內(nèi)完成測定。血清或血漿仍含大量血細胞，室溫下糖酵解旺盛可消耗葡萄糖使測量值降低。室溫放置1小時葡萄糖含量開始降低，3小時后明顯下降。4 oC保存血樣，葡萄糖穩(wěn)定性明顯增加。使用血漿測定葡萄糖濃度可能更接近真實濃度。相比之下用血清標(biāo)本測得的葡萄糖濃度偏低，且隨著樣品放置時間延長而明顯下降。