?線粒體和胞漿蛋白制備試劑盒

貨號：ZK-PL3522

規(guī)格：50次 100次

描述：線粒體和胞漿蛋白制備試劑盒 (Mitochondria Isolation Kit)用于從組織或培養(yǎng)細胞中分離線粒體和細胞胞漿成分。加入分離溶液，勻漿破碎組織細胞，經過數次800g和12000g離心，在60分鐘內即可分離出完整的線粒體和胞漿成分。制備的線粒體具有很高的生物學活性，可進行各種功能研究如酶學測定，更可用于Western Blot,2D-膠、線粒體蛋白或DNA提取、蛋白質組學等研究。嚴格按照說明操作，總是能制備獲得高純度線粒體。一篇方法學研究論文發(fā)現，用普利萊試劑盒制備線粒體的得率、活性、純度優(yōu)于蔗糖密度梯度離心法和Invotrogen/Pierce線粒體提取試劑盒方法。

特點：

1、 操作簡單，可在一小時內完成。

2、 實驗室常規(guī)設備即可，無需超速離心。

3、 制備的線粒體具有高活性，可用于后續(xù)的各類實驗分析。

規(guī)格：

50次 100次

儲存：

?20°C 一年有效

操作步驟：（注意：以下所有操作均在4°C進行）

1. 樣品處理：組織勻漿：取100~200mg新鮮組織樣品，剪為0.5cm2的碎塊放入玻璃勻漿器內。加入1.5mL冰預冷的MitoSolution。研磨組織20次。培養(yǎng)細胞勻漿：800g5min離心收集細胞。單次提取需2-5×107個細胞。加入1.5 mL冰預冷MitoSolution重懸細胞，將細胞懸液轉移到小容量玻璃勻漿器內研磨細胞30次。

2. 將勻漿液轉移到離心管中,800g,4oC離心5min。

3. 取上清液。再次800g,4oC 離心5min。

4. 將上清液轉移到新的離心管。10,000g,4oC離心10min。線粒體沉淀在管底。離心后的上清含胞漿成分，可收集用于對照實驗。

5. 洗滌線粒體：加入0.2mLMitoSolution，輕彈管底重懸線粒體沉淀；12,000g,4oC離心10min棄上清，線粒體沉淀在管底。

6. 重懸線粒體：可以用MitoSolution重懸線粒體沉淀,也可以用合適后續(xù)實驗的自備緩沖液來裂解線粒體沉淀，具體用量是：約每100mg組織提取的線粒體用50μl，約每5×107個細胞提取的線粒體用100μl.用量請根據組織或細胞類型進行微調。

7. 裂解線粒體后，進行蛋白濃度測定。立即使用或?70oC保存。