?植物海藻糖酶（Trehalase）ELISA檢測(cè)試劑盒

貨號(hào)：ZK-P7110

品牌：子科生物ZIKER；
檢測(cè)方法：酶聯(lián)免疫分析檢測(cè)法；
規(guī)格：48T/96T；
包裝：盒；
有效期：6個(gè)月；
保存溫度： 2-8℃;
應(yīng)用范圍：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)使用，不可用于臨床診斷使用；
可檢測(cè)樣品形式：葉片、葉莖、葉桿、根部等植物組織樣本。

一、檢測(cè)范圍、 OD值：具體請(qǐng)咨詢?cè)诰€客服 ，或者來(lái)電索要詳細(xì)說(shuō)明書(shū)！

二、需自備試劑和器材
1． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
2． 自動(dòng)洗板機(jī)。
3.  37℃恒溫箱。
4． 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，最好用多通道移液器。
5． 使用中性 PBS 或 TBS 作為洗滌液。
6  蒸餾水。
7. 吸水紙。

三、樣品的準(zhǔn)備和保存
植物組織的提取，不管是根莖組織還是葉片組織還是果實(shí)組織，都應(yīng)該采用鮮重的計(jì)重方式：
一般要遵循以下原則：
1，稱取的組織重量不能低于50mg。
2，勻漿的比例按照10%，即1g組織加9ml的勻漿液，勻漿液一般選取PBS（PH=7.2-7.4）
3，組織在勻漿器勻漿過(guò)程中，勻漿液應(yīng)該分2次加進(jìn)去，這樣勻漿更充分。
4，充分勻漿完成后離心取上清，離心機(jī)的轉(zhuǎn)數(shù)選取2000-3000轉(zhuǎn)每分，轉(zhuǎn)數(shù)不宜超過(guò)5000.離心時(shí)間為15-30分鐘！

四、操作注意事項(xiàng)
1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。
2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.  濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。
4.  嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

五、洗板方法
1、手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2、自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

六、實(shí)驗(yàn)詳細(xì)操作程序
1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；樣本孔加待測(cè)樣本50μL。
3.  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4.  除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

七、結(jié)果判斷:
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。