中文名稱:5×蛋白上樣緩沖液(含巰基還原劑)
英文名稱:SDS-PAGE loading buffer,5×(with β-Mercaptoethanol)
規(guī)格 :5ml
保存條件:Store at -20 °C for one year.
產(chǎn)品介紹:
本產(chǎn)品適用于SDS-PAGE(SDS變性聚丙烯酰胺凝膠電泳)時作蛋白質(zhì)上樣用。其主要成份為SDS,β-巰基乙醇,溴酚藍(lán),緩沖鹽溶液等。 SDS可與蛋白質(zhì)結(jié)合使蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物上帶有大量的負(fù)電荷,這時蛋白質(zhì)本身的電荷完全被SDS掩蓋,消除了各種蛋白質(zhì)本身電荷的差異,SDS還可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵,破壞蛋白質(zhì)分子的二級和三級結(jié)構(gòu);β-巰基乙醇可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu),消除了蛋白結(jié)構(gòu)之間的差異。最終無電荷及結(jié)構(gòu)上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關(guān);溴酚藍(lán)用作電泳時的指示劑,可大概指示電泳結(jié)束的時間。
使用介紹:
1. 按每4微升蛋白樣品加入1微升蛋白上樣緩沖液的比例,混合蛋白樣品和蛋白上樣緩沖液(5X)。
2. 混勻后,100℃水浴加熱3-5分鐘,使蛋白充分變性。
3. 冷卻到室溫后,10000-14000rpm離心2-5分鐘,取上清直接上樣電泳即可。
4. 通常電泳時染料到達(dá)膠的底端附近(0.5-1cm)即可停止電泳。
注意事項:
1. 上樣緩沖液分為還原型和非還原型兩種,還原型上樣緩沖液中含一定量的DTT或巰基乙醇,有輕微刺激性氣味,較易區(qū)分。
2. 還原型上樣緩沖液中的巰基可使蛋白分子的鏈內(nèi)二硫鍵和鏈間二硫鍵斷裂,使通過二硫鍵連接的各亞單位彼此分離,在電泳凝膠上顯現(xiàn)多個蛋白條帶,選購和使用時請務(wù)必注明,仔細(xì)區(qū)分。
3. 本試劑因含β-巰基乙醇,有一定的毒性,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍(lán)指示劑,PH值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態(tài)下,溶液可能會呈現(xiàn)深棕色,不影響產(chǎn)品使用。