子科生物報(bào)道：圣路易斯華盛頓大學(xué)醫(yī)學(xué)院的研究人員近日?qǐng)?bào)告了一種檢測(cè)急性髓系白血?。ˋML）的新方法，有望徹底改變這種疾病的檢測(cè)和治療方式。這種基于數(shù)字PCR的檢測(cè)方法可以改善由KMT2A基因融合驅(qū)動(dòng)的白血病檢測(cè)，并有可能影響治療決策和應(yīng)答評(píng)估。

這篇題為“Droplet Digital PCR for Oncogenic KMT2A Fusion Detection”的論文發(fā)表在《The Journal of Molecular Diagnostics》雜志上。

急性髓系白血病是一種罕見的侵襲性癌癥，全球每年約有12萬(wàn)人確診。治療過程中殘留病灶的檢測(cè)對(duì)于評(píng)估預(yù)后和指導(dǎo)治療決策至關(guān)重要。目前，在AML治療過程中，檢測(cè)微小殘留?。∕RD）的方法包括骨髓形態(tài)學(xué)、多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)（MPFC）和DNA測(cè)序。

形態(tài)學(xué)評(píng)估只能檢測(cè)到5%的白血病細(xì)胞。多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)的檢測(cè)靈敏度更高，可達(dá)0.01%至0.001%，但在實(shí)施和解釋方面具有挑戰(zhàn)性，而且不同實(shí)驗(yàn)室之間沒有標(biāo)準(zhǔn)化。DNA測(cè)序方法可以通過體細(xì)胞突變圖譜來識(shí)別白血病細(xì)胞，但這種方法價(jià)格昂貴，而且可能會(huì)受到非白血病血細(xì)胞的干擾。

通訊作者、圣路易斯華盛頓大學(xué)醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系的Grant A. Challen博士解釋說：“致癌融合通常是疾病的特征，也是白血病細(xì)胞的獨(dú)特標(biāo)志物，通常不存在于健康細(xì)胞中。其他疾病，比如慢性髓系白血?。–ML），可以通過典型的BCR-ABL融合來追蹤，靈敏地檢測(cè)這些融合已經(jīng)徹底改變了CML的治療方式?！?/p>

“對(duì)于帶有致癌融合的AML患者，KMT2A融合是一種分子標(biāo)志物，可實(shí)現(xiàn)靈敏的殘留病檢測(cè)。因此，我們希望開發(fā)出一個(gè)靈敏的KMT2A融合檢測(cè)平臺(tái)，以改進(jìn)我們檢測(cè)和治療這種疾病的方式，”他說。

研究人員利用微滴式數(shù)字PCR（ddPCR）技術(shù)開發(fā)出一種新型檢測(cè)方法，能夠?qū)ξ鍌€(gè)最常見的KMT2A融合伴侶進(jìn)行檢測(cè)。目前已知有80個(gè)KMT2A融合伴侶，但大約80%的融合只涉及到五個(gè)伴侶 – AF9、AF6、、AF4、ELL和ENL。

他們?cè)谌祟惣?xì)胞系和患者樣本中對(duì)這種方法進(jìn)行基準(zhǔn)測(cè)試，以證明KMT2A融合檢測(cè)的靈敏度和特異性。實(shí)驗(yàn)將cDNA分子分液到微流控液滴中，這些液滴利用引物和探針進(jìn)行檢測(cè)，只有當(dāng)融合轉(zhuǎn)錄物存在時(shí)才會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性信號(hào)。他們將針對(duì)不同融合的多個(gè)引物/探針組合成一種混合的融合檢測(cè)試劑。

Challen博士指出：“我們發(fā)現(xiàn)，這種檢測(cè)方法不會(huì)在健康個(gè)體的樣本中產(chǎn)生假陽(yáng)性信號(hào)。它很容易擴(kuò)展，以包含更多的致癌融合。這有望幫助醫(yī)生確定治療方案和評(píng)估應(yīng)答狀況。了解治療是否有效，對(duì)于決定何時(shí)升級(jí)治療或進(jìn)行造血干細(xì)胞移植至關(guān)重要。”

他總結(jié)道：“這是一種可以靈敏檢測(cè)KMT2A融合的強(qiáng)大工具，適用于由這些融合驅(qū)動(dòng)的白血病患者的疾病檢測(cè)。它填補(bǔ)了致癌融合檢測(cè)的空白，并帶來了一些技術(shù)改進(jìn)。這種檢測(cè)方法還具有可擴(kuò)展性，可輕松添加其他融合，以便覆蓋更大的范圍。我們正在逐步改進(jìn)血癌的檢測(cè)！”