子科生物報道：?2023年9月7日，北京大學(xué)心血管研究所、北京大學(xué)血管穩(wěn)態(tài)與重構(gòu)全國重點實驗室鄭樂民教授與董爾丹教授團隊聯(lián)合北京天壇醫(yī)院王擁軍教授團隊，共同合作在Neuron雜志上發(fā)表題為“NAD+ rescues aging-induced blood-brain barrier damage via the CX43-PARP1 axis”的研究論文。該研究報告了CX43-PARP1-NAD+通路在血腦屏障相關(guān)血管細胞衰老中的重要作用，并揭示了該通路在衰老過程中保護血腦屏障功能的潛在治療策略。

論文截圖

血腦屏障（blood-brain barrier，BBB）是指腦毛細血管內(nèi)皮細胞、周細胞與神經(jīng)膠質(zhì)細胞偽足共同形成的血液與腦細胞之間的屏障，能夠透過營養(yǎng)物質(zhì)并阻止血液中的有害物質(zhì)進入大腦。血腦屏障這一選擇透過性結(jié)構(gòu)可使腦組織免受循環(huán)血液中有害物質(zhì)的損害，從而保持腦組織內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，對維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)正常生理狀態(tài)具有重要的生物學(xué)意義。衰老過程中血腦屏障通透性會逐步增加。血腦屏障功能紊亂與一系列的腦血管病變以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病密切相關(guān)，包括缺血性卒中（stroke）、癲癇、阿爾茨海默癥和漸凍癥等。然而，衰老過程中，如何保護血腦屏障完整性，逆轉(zhuǎn)后續(xù)的神經(jīng)損傷，目前并不清楚。

圖1. 衰老腦皮層單細胞核測序及血腦屏障相關(guān)細胞亞群的劃分

本研究中，作者首先通過小鼠腦皮層組織單細胞核測序，對BBB相關(guān)細胞亞群進行了劃分，并對BBB相關(guān)細胞亞群進行了特征基因表達的表征，之后通過比較老年組和年輕組的差異，發(fā)現(xiàn)基因Gja1（gap junction 1的縮寫，蛋白名為connexin 43，CX43）主要富集在BBB相關(guān)細胞亞群，并且在老年組中表達水平顯著下降。作者繼續(xù)使用了人腦前額葉皮層切片樣本和老年小鼠腦組織切片樣本對這一發(fā)現(xiàn)進行了驗證，并且通過使用全身敲除CX43和血管Cdh5+組織特異性敲除CX43小鼠，利用活體雙光子共聚焦熒光成像技術(shù)，發(fā)現(xiàn)了缺失CX43會進一步破壞BBB完整性。

圖2. 代謝組學(xué)篩選發(fā)現(xiàn)CX43缺失顯著降低了NAD+水平

為了找到CX43影響血腦屏障功能的分子機制，作者團隊對小鼠腦皮層組織進行了代謝組學(xué)篩選，發(fā)現(xiàn)了在敲除CX43的雜合小鼠腦皮層組織中，煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide，NAD+，是參與多種細胞代謝的電子受體，和參與線粒體三羧酸循環(huán)和電子傳遞鏈的脫氫酶的輔酶，在代謝過程中通過轉(zhuǎn)遞電子，轉(zhuǎn)換為其還原形式NADH）的水平明顯下降。通過活體雙光子熒光壽命成像技術(shù)，驗證了CX43缺失導(dǎo)致的腦血管相關(guān)細胞內(nèi)NAD+代謝活性率的下降。

為了進一步弄清楚CX43調(diào)控NAD+水平的具體機制，研究團隊對與CX43相互作用的蛋白質(zhì)進行了蛋白質(zhì)組學(xué)分析。他們首先利用免疫共沉淀的方法，獲得了與CX43相互作用的蛋白質(zhì)，再通過高效液相-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用的方法，對與CX43相互作用的蛋白質(zhì)進行了分析篩選，發(fā)現(xiàn)了與CX43直接作用的蛋白腺苷二磷酸核糖聚合酶（poly ADP-ribose polymerase，PARP1，EC 2.4.2.30）。PARP1是NAD+的消耗酶之一，通過消耗三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）和NAD+，參與蛋白二磷酸腺苷（adenosine diphosphate，ADP）化修飾和DNA損傷修復(fù)。接下來本研究驗證了CX43與PARP1的直接相互作用，并且發(fā)現(xiàn)在老年樣本和CX43缺失樣本中，PARP1在血管相關(guān)細胞的細胞核內(nèi)表達顯著上升，揭示了CX43缺失條件下，PARP1活性增強、過度消耗NAD+的這一分子機制。

最后，研究團隊通過長期干預(yù)煙酰胺單核苷酸【nicotinamide mononucleotide，NMN，可經(jīng)過NMN腺苷酸轉(zhuǎn)移酶（NMN adenylyl-transferase，NMNAT，EC 2.7.7.1）代謝合成NAD+】或奧拉帕尼（Olaparib，PARP抑制劑，也作用于BRCA1或BRCA2突變，臨床上用于治療BRCA突變的腫瘤，比如乳腺癌、前列腺癌等）給藥等方式，能夠有效逆轉(zhuǎn)衰老引起的血腦屏障損傷，并對缺血性卒中模型具有良好的保護作用。

圖3.  CX43-PARP1軸通過調(diào)控NAD+水平逆轉(zhuǎn)衰老相關(guān)血腦屏障損傷的示意圖

綜上，這些發(fā)現(xiàn)確立了內(nèi)皮細胞CX43-PARP1-NAD+通路在腦血管衰老中的重要作用，提出了通過奧拉帕尼抑制PARP1活性或煙酰胺單核苷酸補充是一種潛在的治療策略，通過緩解衰老相關(guān)的血腦屏障滲漏，以對抗衰老相關(guān)的腦血管病變和認知損傷等疾病。

鄭樂民課題組已出站博士后戰(zhàn)銳博士【現(xiàn)已加入康復(fù)大學(xué)（籌）進一步開展代謝調(diào)控血腦屏障功能的相關(guān)研究，北京大學(xué)-清華大學(xué)生命科學(xué)聯(lián)合中心基金支持獲得者】、王擁軍團隊孟霞醫(yī)生為論文的共同第一作者。鄭樂民、王擁軍、董爾丹為該論文的共同通訊作者。參與作者汕頭大學(xué)田東萍教授，北京天壇醫(yī)院許杰博士為本文提供了重要幫助。文章同時受到了美國貝勒醫(yī)學(xué)院孫正教授、美國密歇根大學(xué)陳育慶教授的大力支持與幫助。該研究工作獲得了國家重點研發(fā)計劃、國家自然科學(xué)基金、北京市自然科學(xué)基金等項目支持，得到了北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部-德國烏爾姆大學(xué)神經(jīng)科學(xué)聯(lián)合中心、北京大學(xué)血管穩(wěn)態(tài)與重構(gòu)全國重點實驗和國家神經(jīng)系統(tǒng)疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心腦庫的大力支持和幫助。

鄭樂民團隊長期從事代謝性心腦血管疾病的相關(guān)研究，近年來在細胞代謝功能對疾病影響等方面取得了系列研究成果，提出了多個重要的心腦血管疾病干預(yù)生物靶標(biāo)，為早期干預(yù)和治療代謝紊亂致心腦血管功能失衡提供了重要的理論基礎(chǔ)和轉(zhuǎn)化前景。課題組研究主要聚焦在細胞代謝物對腦血管功能，如血腦屏障和缺血性卒中的影響（Neuron 2023，Stroke 2022，Cell Death&Dis 2018）；代謝物對大血管疾病，如主動脈夾層發(fā)病的影響（European Heart J 2021，Advances Sci 2022，Cardiovasc Res 2021，STTT 2023）；以及代謝對心臟與肝臟等器官代謝功能的影響（Cell Metabolism 2023，Nat Commun 2022，Kidney Int 2021）等。鄭樂民也作為第一獲獎人獲得2022年北京醫(yī)學(xué)科技獎一等獎。